Enterobactérias

As enterobactérias são um grupo de bacilos gram-negativos fermentadores de glicose com ou sem produção de gás, são aeróbios e anaeróbios facultativos, a maioria reduz nitrato a nitrito, e a maioria é oxidase negativa e catalase positiva, Podem ser móveis por flagelos peritríqueos ou imóveis, crescem bem em meios comuns de cultura, como ágar MacConkey. Constituído por poucas bactérias que são patogênicas, algumas outras são considerados patógenos oportunistas. Estão presentes no solo, plantas, na água e no trato gastrointestinal de humanos e dos animais. E podem ser responsáveis por causar:

• Abscessos;

• Pneumonia;

• Meningites;

• Septicemias;

• Infecções de feridas, trato urinário e trato gastrintestinal.

As principais enterobactérias isoladas em IRAS, constituindo cerca de 99% dos isolamentos de enterobactérias de importância clínica, são:

• Escherichia coli;
• Klebsiella spp.;
• Enterobacter spp.;
• Proteus spp.;
• Providencia spp.;
• Morganella spp.;
• Citrobacter spp.;
• Salmonella spp.;
• Shigella spp.;
• Serratia spp.

As enterobactérias que atualmente predominam nas IRAS são:

• Escherichia coli;
• Klebsiella spp.;
• Enterobacter spp.

As isoladas com menor freqüência são:

• Edwardsiella spp.;
• Hafnia spp.;
• Yersinia spp.

As enterobactérias crescem bem em meios comuns e seletivos para isolamento de bacilos gram-negativos. As colônias apresentam um aspecto, opaco, brilhante, transparente ou mucóide.

IDENTIFICAÇÃO

A identificação das Enterobactérias é a partir da produção ou não de diferentes enzimas que fazem parte do metabolismo bacteriano que podem ser detectadas meios especiais em técnicas de cultivo in vitro. Nesses meios possuem substratos que interagem com as enzimas, com um indicador, que vai detectar a utilização do substrato. Por meio de vários meios que detectam diferentes características metabólicas dos microrganismos, é estabelecido um perfil bioquímico para identificar cada espécie.

Primeiramente, é necessário realizar os exames microscópicos e macroscópicos da cultura, para a identificação das enterobactérias. O exame microscópico se faz por meio da coloração de Gram, para analisar a morfologia e coloração dos bacilos. Já o exame macroscópico, permite ver o tamanho, aspecto morfológico e coloração das colônias nos meios simples e nos meios seletivos. Em seguida, a identificação pode ser realizada com os meios Triple Sugar Iron (TSI), EPM, Mili, e/ou Rugai modificado por Pessoa e Silva (Meio de IAL). E também podem ser realizados testes complementares como a descarboxilação da ornitina, arginina de-hidrolase, utilização do citrato, prova da DNase e prova de Voges Proskauer, e quando for necessário, a fermentação de alguns açúcares.

Triple Sugar Iron (TSI)

O meio consegue diferenciar bacilos Gram-negativos através da presença ou ausência da fermentação de carboidratos, da produção de sulfato de hidrogênio e da produção de gás. O meio possui, originalmente, a cor vermelho laranja, levemente opalescente.

Se o meio apresentar no ápice, a cor amarela e a base cor púrpura, é indicativo de apenas fermentação de glicose (lactose e sacarose, negativos); caso o meio apresente tanto o ápice como a base de cor amarela, é indicativo de fermentação da glicose + lactose e/ou sacarose (2 ou 3 açúcares); se o meio possuir a presença de gás (CO2) o meio irá se apresentar com bolhas ou fragmentado; e havendo também a presença de um precipitado negro, será indicativo de H²S positivo.

MILi

Esse meio é para teste de motilidade, indol e lisina. É necessário primeiro analisar se há reações da motilidade e lisina, antes de colocar o reagente de Kovacs para detectar a formação de indol. Para analisar a presença de motilidade, tem que observar se há crescimento na linha do inóculo e envolta dela, dessa forma, será indicativo de motilidade positiva, caso houver crescimento somente na linha do inóculo, é indicativo de motilidade negativa. Para analisar a presença de reações de lisina, tem que observar se há formação da cor púrpura no meio, o qual será indicativo de Lisina decarboxilase positiva, caso o meio estiver amarelo, é indicativo de Lisina decarboxilase negativa. Para analisar a formação de indol, é necessário utilizar o reagente de Kovacs, após a sua adição, se apresentar cor pink/vermelho, é indicativo de indol positivo, caso após a sua adição apresentar a formação de cor amarela, é indicativo de indol negativo.

EPM

Esse meio possui testes de fermentação glicose e produção de gás, produção de H2S, hidrólise da uréia e desaminação de triptofano. Para a identificação, é necessário analisar se há formação de bolhas ou rachaduras do meio, o que indica produção de gás; se há produção do pigmento negro de qualquer intensidade, o que indicará produção de H2S; para analisar a hidrólise da uréia, tem que observar se há formação da coloração azul esverdeada na base, o que indica prova positiva; e para analisar se houve desaminação do triptofano, é necessário observar se há formação da coloração verde escuro ou acastanhado, o que indica reação positiva, se o meio estiver inalterado, indicará reação negativa.

Ágar Citrato de Simmons

Tem como utilidade, diferenciar os gêneros e espécies de enterobactérias e não fermentadores. Esse meio ajuda a verificar a capacidade que a bactéria tem de utilizar o citrato de sódio como sua única fonte de carbono, juntamente com os sais de amônia, alcalinizando o meio. O meio possui como cor original, a cor verde. Para analisar a capacidade que a bactérias têm de utilizar o citrato de sódio, é necessário analisar se há formação da cor azul ou crescimento no local do inóculo, o que indicará positivo; caso apresente cor inalterada e ausência de crescimento, indica resultado negativo.

IAL

No meio de IAL,podemos analisar nove reações bioquímicas em um único tubo. É possível analisar: Fermentação da glicose; Produção de gás; Fermentação da sacarose; Desaminação do L-triptofano; Produção de indol; Produção de sulfeto de hidrogênio (H2S); Hidrólise da uréia; Descarboxilação da lisina (LDC); Motilidade.

E.coli

Caracteristicas que vão definir a espécie: fermentam lactose e produzem indol.

Salmonella

Possui como características: produção de pouco gás a partir da fermentação da glicose, são em geral lactose negativas, sacarose negativas e produção de H2S.

Shigella

Características: raramente produzem gás e são LDC negativas e imóveis.

Citrobacter

Caracteristicas: são LDC negativas, citrato positivas e a maioria fermenta a sacarose, a lactose e o glicerol.

Klebsiella

Características: São VP positivas, fermentam uma boa parte dos carboidratos e possuem colônias mucóides, lactose positiva, são bastante comuns, são imóveis e a maioria das espécies é LDC positiva.

Enterobacter

Características: São VP positivas, a boa parte das cepas de todas as espécies são móveis e extremamente variáveis bioquimicamente.

Serratia

Características: a maioria é LDC positiva, lactose negativa e produz pouquíssimo gás a partir da fermentação da glicose.

Morganella

Providencia

Proteus

As tres espécies se caracterizam pela desaminação do triptofano. O gênero Proteus diferentemente dos outros dois gêneros é gelatinase e H2S positiva.

Referências:

ANVISA - Agência Nacional de Vigilância Sanitária. Módulo 2- Gram-negativos não fermentadores. Disponível em: https://www.anvisa.gov.br/servicosaude/controle/rede_rm/cursos/boas_praticas/MODULO2/objetivos.htm

ANVISA- Agencia Nacional de Vigilancia Sanitária.Descrição dos Meios de Cultura Empregados nos Exames Microbiológicos - Módulo 4. Disponível em: https://www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/microbiologia/mod_4_2004.pdf

ANVISA - Agência Nacional de Vigilância Sanitária. MICROBIOLOGIA CLÍNICA PARA O CONTROLE DE INFECÇÃO RELACIONADA À ASSISTÊNCIA À SAÚDE - Módulo 6: Detecção e identificação de bactérias de importância médica. Disponível em: https://spdbcfmusp.files.wordpress.com/2014/09/iras_modulodeteccaobacterias.pdf